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液相色譜柱在使用前應(yīng)注意以下事項
更新時間:2023-01-28   點擊次數(shù):915次
  液相色譜柱在使用前,最好進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照液相色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
 
  1、樣品的前處理:
  ①最好使用流動相溶解樣品;
  ②使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì);
  ③使用0.45μm或0.22μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
 
  2、流動相的配制:
  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
 ?、倭鲃酉鄬悠肪哂幸欢ǖ娜芙饽芰ΓWC樣品組分不會沉淀在柱中;
 ?、诹鲃酉嗯c樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng);
 ?、哿鲃酉嗟酿ざ纫M量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命;
 ?、芰鲃酉嗟奈锘再|(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制;
 ?、萘鲃酉喾悬c不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行;
  ⑥在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
 
  3、流動相流速的選擇:
  因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的液相色譜柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的液相色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳;
  當(dāng)選用最佳流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間。
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